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PCR CUANTITATIVA

Fundamentos

La PCR cuantitativa (qPCR), o en tiempo real, se realiza en un equipo que integra un termociclador convencional y un espectrofluorímetro que determina la fluorescencia que se produce en el tubo de amplificación en todo momento a lo largo del proceso. La PCR quantitativa combina la amplificación de DNA con la detección, teniendo lugar en un mismo tubo. El fluoróforo está presente constantemente en la reacción y la señal obtenida al final de cada ciclo de amplificación se representa en una gráfica frente al número de ciclos y se obtiene una curva que muestra el transcurso del proceso.

El equipo utiliza una lámpara de tungsteno para emitir la luz que excita al fluoróforo y una cámara CCD que determina la fluorescencia emitida a diferentes longitudes de onda en función del fluoróforo que se utiliza. La cámara CCd es multicanal, lo que permite realizar diversos análisis simultaneos en el mismo tubo de PCR.

La cuantificación se consigue mediante el empleo de una curva patrón en la que se representan las intesidades de fluorescencia conseguidas frente a las concentraciones conocidas de un fragmento identico al que se quiere cuantificar.

 

 

Aplicaciones

La PCR Cuantitativa tiene múltiples aplicaciones entre las que se encuentran:

  • Discriminación alélica
  • Expresión génica / Cuantificación de RNA
  • Detección de SNPs (single nucleotide polymorphisms)
  • Detección de patógenos / microorganismes (presència / absència)
  • Cuantificación  de OGMs (organismos genéticamente modificados)
  • Cuantas aplicaciones sean compatibles con el fundamento del equipo y de la técnica.

 

Equipamiento

 

  • ABI PRISM 7000 Sequence Detection System de Applied Biosystems.

PCR

 

 

  •  StepOne Plus de Life Technologies.

 

 

Requisitos de las muestras

  • Las muestras deben entregarse en la placa proporcionada y selladas con el film.

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